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TECNICA DE AMILASA EN SUERO Y ORINA

TECNICA DE AMILASA

 EN SUERO Y
ORINA

 TECNICA 1

FUNDAMENTOS
DEL MÉTODO:

El almidón del
sustrato es hidrolizado por la amilasa de la muestra. La reacción se detiene
por el agregado del reactivo de iodo2, que al mismo tiempo desarrolla color con
el almidón remanente.

La disminución del
color respecto a un sustrato control es la medida de la actividad enzimática de
la muestra.

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VALORES DE REFERENCIA :
Suero: menos de 120 UA/dl
Orina: de 30 a 260 UA/ hora

 

TECNICA 2

FUNDAMENTO:

PRINCIPIO DEL MÉTODO
La α-amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G), según la siguiente reacción:
10 CNPG3⎯⎯⎯⎯⎯Amilasa→9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de α-amilasa en la muestra ensayada1

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REVISION GENERAL D E LAS PRUEBAS EN QUIMICA CLINICA



REVISION DE LAS PRUEBAS EN QUIMICA CLINICA 
ABBOT DIAGNOSTIC

 

Mediante las pruebas sanguíneas se pueden
identificar múltiples componentes químicos. Para establecer un patrón de
anormalidad, por lo general, es necesario cuantificar varias sustancias
químicas. Existen pruebas que se pueden agrupar y catalogar en enzimas,
electrolitos, azúcares sanguíneos, lípidos, hormonas, vitaminas, minerales e
investigación de fármacos, mientras que otras carecen de un común denominador.
Hay estudios especiales que sirven para detectar lesiones en algunos órganos
blancos.

 


PERFILES BIOQUIMICOS GENERALES

Los perfiles son un grupo de pruebas que ayudan
a descubrir ciertas patologías, entre los más frecuentes están los siguientes:

 

TRASTORNO

PRUEBAS
SUGUERIDAS

Enzimas cardiacas

 

CK, TGO,LDH

Función /  patología renal

 

 

Urea, fósforo, LDH, creatinina, depuración de
creatinina, ácido úrico, proteínas totales, relación A/G, ALBÚMINA,
GLOBULINAS, CALCIO, GLUCOSA, COLESTEROL.

 

 

 

Lípidos

 

 

 

 

Colesterol, Triglicéridos, electroforesis de
lipoproteínas (LDL, VLDL, HDL).

Función / patologia hepática


Bilirrubinas totales, fosfatasa alcalina,
colesterol, GGT, proteínas totales, relación A/G, albumina, globulinas,
AST,LDH, perfil de hepatitis viral, tiempo de protrombina, TTpa,.

Función tiroidea.

Captación de T3,
T4, T4 libre, T7, Índice de tiroxina libre (FTI), TSH.

 

 

USO DEL EQUIPO AUTOMATIZADO

 

Los sostificados instrumentos automatizados
permiten realizar una gran variedad de pruebas químicas en una sola muestra de
sangre y reportar una gran variedad de pruebas químicas en una sola muestra de
sangre y reportar los resultados de manera oportuna. Las redes computarizadas
transmiten la información directamente entre laboratorios y hospitales.
Probablemente, ene l futuro, los impresos de las computadoras formen parte del
expediente.

Pero este método no es simplemente una línea de
base para realizar comparaciones futuras, sino que también ah permitido
descubrir enfermedades no conocidas y ha ayudado al diagnóstico precoz cuando
los síntomas son vagos o inexistentes.

Los valores de referencia para cualquier
determinación química varían según el método o ensayo que utilice. Por ejemplo,
las diferencias en el  sustrato o la
temperatura utilizada en el ensayo alteran los límites normales.

Por lo tanto, estos límites pueden resultar
diferentes entre un laboratorio y otro.

 

Las pruebas bioquímicas
que se piden con más frecuencias son:

  •      
    Albúmina,globulina

  •      
    Fosfatasa
    alcalina.

  •      
    Transaminasa
    de aspartato (AST)

  •      
    Urea.

  •      
    Cálcio
    sérico.

  •      
    Colesterol.

  •      
    Creatinina.

  •      
    Glucosa.

  •      
    Fósforo
    inorgânico.

  •      
    Bilirrubina
    total.

  •      
    Proteínas
    totales.

  •      
    Triglicéridos.

  •      
    Acido
    úrico.

  •      
    Eletrólitos: sódio, potasio y cloro.

 
Los patrones de los valores
anormales proporcionan datos para llegar a un diagnóstico definitivo.
Algunas pruebas se envían a
laboratorios de referencia o comerciales. Un porcentaje de éstas resulta
demasiado sostificado o muy escaso por lo que no siempre se puede tener de
inmediato los resultados.

URIDILTRANSFERASA DE GALACTOSA

FOSFOGLUCO-ISOMERASA (FGI O PHI)

FOSFOGLUCO-ISOMERASA
 (FGI o PHI)
Sinonimo: Glucosafosfato-isomerasa

Valores normales:

  • Menos de 40 U (Método de Bodansky)
  • 13-130 UI (Método de Santabárbara)

Significaco clínico:

  • Esta elevada en al fase aguda de la hepatitis. En las ictericias obstructivas es normal,pero en algunos casos se eleva también.

La fosfo-hesoxa-isomerasa es, sobre todo, un marcador neoplásico, especialmente del cáncer mestastizado y de utilidad para su seguimiento posterapéutico y pronóstico, sobre todo asociado ala detrminación del CEA. La FGI puede elvarse moderadamente en las neumopatías benignas con infección aguda, pero si se sostiene alta y puede descartarse infección o hepatopatía , tiene valor diagnóstico en el cáncer.

ALDOLASA en suero

4.1.2.13 ALDOLASA

DESCARGA

INTRODUCCION

La aldolasa es una enzima involucrada en la descomposición de la glucosa, la fructosa y la galactosa, el cual es un proceso utilizado por las células para generar energía en la forma de ATP (adenosintrifosfato). La aldolasa se encuentra en los músculos en una concentración particularmente alta.La aldolasa está encargada de la catalización de la fructosa 1, 6 difosfato para formar dos triosas: dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehido 3-fosfato.

 

EXISTEN DOS TIPOS DE ALDOLASAS:

ALDOLASA MUSCULAR (ALD)

·        Es la fructosa 1-6 diofosfato-aldolasa

ALDOLASA HEPATICA

·        Es la fosfofructoaldolasa ( o fructosa-1-fosfato-aldolasa) y se llama aldolasa hepática por que existe casi exclusivamente en el hígado de ahí su interés clínico.

·        Normalmente no existe en la sangre. Aparece en el suero en lesiones hepáticas y en un grado paralelo a al extensión del daño celular. Ausente en las ictericias obstructivas, así como ene l infarto al miocardio y en las miopatías.

La aldolasa se usa como un marcador para la enfermedad muscular. Esta enzima cataliza la conversión de la fructuosa-1-6-difosfato en gliceraldehído-3-fosfato + fosfato de dihidroxiacetona. La isoenzima A, con una especificidad relativamente elevada para la fijación de la fructuosa-1-6-difosfato, se encuentra en gran parte en el músculo esquelético. Se ven niveles elevados en las enfermedades musculares, como la distrofia muscular de Duchenne, la dermatomiositis y la triquinosis. La enfermedad muscular neurogénica o enfermedad de la placa motora (tal como la miastenia gravis) produce elevaciones más bajas de esta enzima.

SINONIMOS: D- Fructosa-1,6-difosfato-D-gliceroaldehído-3-fosfato-liasa, ALD, aldolasa fructosa bifosfato

Método: Ultravioleta, cinético y enzimático.

      Según Beisenherz, espectrofotometría UV cinética 340nm.-Ultravioleta, cinético y enzimático.

METODOS DE PUNTO FINAL:

·        Miden la actividad enzimática de la aldolasa que se lleva acabo a partir de la reacción gliceraldehido fosfato a partir del 2-4 dinitrofenil hidracina.

METODOS CINETICOS:

·        Mide el NADH2

·        La triosa isomerasa monofosfato cambia el grupo aldehído

Los métodos UV y enzimáticos determinan la actividad total de la enzima por lo tanto no son específicos para la aldolasa del músculo.

 Muestra:

·        Se requiere ayuno de 8 horas. Suero y plasma son  muestras aceptables. Si se utiliza plasma se pueden utilizar los siguientes anticoagulantes: EDTA, heparina de litio, heparina de amonio y heparina sódica.

La muestra se recolecta en tubos de vidrio o plástico con o sin gel. Centrifugar la muestra después de la recolección tan pronto como sea posible, asegurándose de la completa formación del coágulo antes de centrifugar. 

Algunas muestras especialmente de pacientes con terapia anticoagulante o trombolítica incrementa el tiempo de formación del coágulo. Si la muestra se centrifuga antes de la formación completa del coágulo, la presencia de fibrina puede causar resultados erróneos. No debe usarse suero o plasma hemolizado, la hemólisis interfiere en la determinación.

ALAMCENAMIENTO:

·        Suero y plasma: las muestras son estables 5 días a 0- 4°C y 1 mes a -20°C.

Valor de referencia:

·        Adulto: 1.5-8.1 U/L

·        1 mes a 6 años: 3.0-16 U/L

·        0-1 mes: 6.0-32.0 U/L

La aldolasa es una enzima que se encuentra en el corazón y el músculo esquelético, es importante en al conversión de glucogeno a acido láctico. Está principalmente en las células jóvenes y también en sus núcleos.

Esta conformada por dos subunidades, cada una con tres posibles subunidades denominadas A, B y C, pero son justamente 4 isoenzimas. La forma molecular AAAA es la aldolasa predominante en el músculo esquelético, la BBBB predomina en el hígado y la CCCC en el cerebro y otros tejidos. Una isoenzima híbrida AAAC está presente en algunos tejidos pero en concentraciones más bajas.

UTILIDAD CLÍNICA:

  •      
    Evaluación de distintos tipos de miopatias
  • Es útil en las situaciones complejas de diagnóstico para valorar el desgaste muscular y la degeneración del músculo esquelético.Al reducirse la masa muscular, disminuye la cifra de aldolasa.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

      La aldolasa es una enzima de la vía glucolítica que se usa ocasionalmente como marcador para la enfermedad muscular aunque no es específica del tejido. Se prefiere el uso de CK más específica del músculo esquelético.

      Se trata de una enzima muscular, también presente en hígado y cerebro.
Los niveles disminuyen frente a enfermedades miodegenerativas crónicas con baja masa muscular.
Los niveles están aumentados en distrofias musculares, dermatomiositis, polimiositis y triquinosis.
La enfermedad muscular neurogénica o enfermedad de la placa motora (tal como la miastenia gravis) produce elevaciones más bajas de esta enzima.

VARIABLES POR ENFERMEDAD:

AUMENTADO:

  •       Las cifras mas elevadas de aldolasa se observan en al distrofia muscular de Duchenne.
  •       Poliomiositis
  •       Distrofia muscular de extremidades y cintura
  •       Anemias granulocíticas y megalobásticas.
  •       Gangrenas extensas, neumonía, infarto pulmonar, anemia hemolítica y psicosis alcohólica.
  •       Hepatitis aguda, infarto de miocardio; procesos con desintegración hística como pancreatitis hemorrágica,
  •       Trauma que comprometa al músculo. Miositis, dermatomiositis, distrofias miotónicas, rabdomiolisis, triquinosis, delirium tremens, cáncer con metástasis hepáticas.
  •       En el 60-80% de pacientes con psicosis, esquizofrenia, tétanos.
  •       La aldolasa es normal en las atrofias neurogénicas, esclerosis múltiple y miastenia grave

Desarrollo normal:

Recién nacidos (valores cuatro veces mayores a los de los adultos, dos veces el rango del adulto durante al infancia temprana, disminución gradual del adulto hacia los 18-20 años).

DISMINUIDO:
                        
Cánceres epiteliales de esófago, páncreas, pulmón, mama. Intolerancia hereditaria a la fructuosa.

INTERFERENCIAS:

Preanalíticas:

      Aumentado:
Por inyecciones intramusculares.
Por hemólisis (ya que la enzima se encuentra en plaquetas y leucocitos y hematíes).
Habrá aumento analítico por contacto con el coágulo y por hemólisis.
Habrá aumento fisiológico por etanol, ejercicio muscular.

 

Por drogas:

      Aumentado:
Fenotiacinas. Por ingestión de insecticidas clorados y organofosforados tiabendazol, aspirina. Clofibrate, ACTH, cortisona, desoxicorticosterona.

     
Disminuido:
Por probucol.

REFERENCIAS:

Aldolasa en sangre http://d1.scribdassets.com/ScribdViewer.swf?document_id=8705313&access_key=key-1spvm9uqzzxmn8et6psx&page=1&version=1&viewMode=list

PIRUVATO QUINASA (PK)

EC. 2.7.1.40
PIRUVATO QUINASA (PK)


La piruvato quinasa (ATP: piruvato 2-O-fosfotransferasa; EC 2.7.1.40) es una enzima que cataliza la transformación de fosfoenolpiruvato y ADP enpiruvato y ATP. La reacción es la segunda de la ruta glicolítica que
genera
ATP. En los eritrocitos los iones potasio y los bivalentes manganeso sonabsolutamente necesarios para la actividad de la enzima, que es clave en
la
ruta central del metabolismo de los hidratos de carbono y aparece en
todas
las células vivas.

En la especie humana se han identificado dos genes codificantes de
lapiruvato quinasa, el PK-M y el PK-LR. En el proceso de transcripción,
estosgenes originan 4 isoenzimas diferentes con actividad piruvato
quinasa,denominados M1, M2, L y R, las cuales se expresan de forma
diferente encada tejido u órgano (11, 13). Todas las formas consisten
en tetrámeros consubunidades de unos 50-60 kDa, y muestran algunas
propiedades molecula-res y físico-químicas similares, pero difieren en
sus propiedades cinéticas yreguladoras


VALORES NORMALES:

> 20 mU/ml


SIGNIFICADO CLINICO:

  • Aumenta su
    actividad en el suero durante el infarto al miocardio, especialmente en el
    segundo día.
    Cifras muy elevadas se observan en al distrofia muscular progresiva en fase activa
    y discretamente  altas en las miositis y dermatomiositis.


ENZIMAS -OCT–GLUTATION S TRANSFERASA


EC 2.1.3.3
ORNITIN -CARBAMIL- TRANSFERASA (OCT)

  • Enziama específicamente hepática.

Valores normales:

  • 0-500 U SIGMA/ML

Significado clinico:

  • Se eleva su actividad en el suero de los enfermos con lesión hepatocelular, especialmente en als hepatitis agudas, pero también en el hepatoma secuandario y en menor grado en al cirrosis.

EC 2.5.1.18
GLUTATION -S- TRANSFERASA


Sinonimo: GST

  • Enzima presente en el citosol de los hepatocitos.
  • Las glutation S-transferasas (EC 2.5.1.18) pertenecen a una familia de enzimas de gran importancia en mecanismos de desintoxicación celular, eliminando xenobióticos o substanciasnocivas para las células. Estas enzimas catalizan el ataque nucleofílico del sustrato fisiológico, glutation reducido ó GSH (g-Glu-Cys-Gly) sobre el centro electrófilo de un gran número de estructuras tóxicas. En mamíferos estas isoenzimas (GSTs) existen como homdímeros o como heterodímeros, tienen una masa molecular de aproximadamente 25 kDa por subunidad y un sitio activo por monómero. Se clasifican en siete familias (alpha, kappa, mu, pi, sigma, theta y zeta) que se diferencian tanto en su secuencia, propiedades inmunológicas y papel fisológico
    (1).
    La GST humana de la clase pi (hGST P1-1) está implicada en el desarrollo de resistencia de tumores frente diversos fármacos anticancerígenos . Se ha observado que la expresión de hGST P1-1 es elevada en algunos tumores humanos como cánceres de pulmón, colon, ovario, testículos, vejiga, bucal y riñón. Por tanto el uso de inhibidores específicos de la enzima podrían potenciar la eficacia de la quimioterapia sobre tumores resistentes a drogas   anticancerígenas

Muestra:

  • Suero

Metodo:

  • RIA

SIGNIFICADO CLINICO:

  • Su aumento aparece en distintas hepatopatías, pero se ha llamado interés sobre al sensibilidad de la GST en al sobredosis de paracetamol, incluso en formas con transaminasas normales.
  • También en la cirrosis alcohólica con antisueros adecuados,pueden detectarse valores altos de GST ene l plasma.

FUENTE:


TRANSAMINASA GLUTAMICO OXALACETICA


TRANSAMINASA
GLÚTAMICO OXALACÉTICA
-TGO-

Elaboro: Químico Clínico Willians Sanchez Rodríguez


">VALORES NORMALES

UTILIDAD CLINICA

Un amplio
rango de entidades alteran la AST
que es originada en muchos órganos. Cuando la AST está aumentada a partir del hígado, lo más
probable es que esté relacionada a enfermedad del hepatocito. Otras enzimas,
como la fosfatasa alkalina y la
GGT, son indicadores más sensibles de obstrucción biliar. Las
posibles causas de AST bajas son la uremia, la deficiencia de Vit.B6, drogas
como el metronidazol. Causas de AST alta: ingestión crónica de alcohol, cirrósis.
En la hepatitis por alcohol generalmente son menores de 300 U/L. En la
hepatitis viral, por la observación de la relación AST/LDH, con un radio >
3; y un pico muy alto de AST entre 500-3000U/L en las hepatitis virales.


La AST se aumenta
en otros tipos de enfermedades del hígado, incluyendo estadíos tempranos de
hemocromatósis y daño químico (necrósis relacionado con toxinas como el
tetracloruro de carbono). Algunos casos de colecistitis pueden causar aumento
de la AST. Tanto
la AST como la ALT pueden estar elevadas en
sindrome de Reye.



En la mononucleósis infecciosa, la LDH está considerablemente más
alta que la AST. En
traumas (cirugías) y otras enfermedades del músculo estriado, incluyendo la
distrofia, dermatomiositis, trichinosis, polimiositis y gangrena, son causa de
AST alta. Elevación de la AST
y ALT son encontradas en la distrofia muscular de Duchenne. Se observa CK alta
en la miositis, la LD5
alta (o patrón isomórfico en algunos casos de polimiositis). En el infarto de
miocardio los picos de AST aparecen después de 24 horas del infarto y regresa a
valores normales 3-7 días después. La
AST se aumenta en la falla congestiva con congestión
centrolobular del hígado, en la cual se encuentra altas la LD5 sobre las isoenzimas LD,
además en la pericarditis, miocarditis, pancreatitis, y otros estados
inflamatorios que incluyen enfermedad del Legionario.

En el infarto renal la LD
generalmente está alta con relación a la AST. En el infarto de pulmón y en otras entidades
que conducen a necrósis, incluyendo tumores necróticos, la AST está aumentada. En casos
de shock (también la LDH
puede aumentarse), hipotiroidismo y ciertas enfermedades del SNC pueden
aumentar la AST. Un
amplio número de drogas comunmente utilizadas han sido reportadas como causa de
AST elevada: isoniazida, feotiazinas, eritromicina, progesterona, esteroides
anabólicos-androgénicos, metildopa, opiáceos, indometacina, salicilatos en
niños.

La hepatoxicidad a partir de drogas puede
causar aumento de la actividad de la
AST con elevación en la relación AST / ALT. La
hepatotoxicidad por acetaminofén merece una mención especial. En pacientes
alcohólicos, dosis aparentemente moderadas de analgésicos pueden causar severa
toxicidad. Dosis de 2.6-16.5 g/24 horas fueron reportadas con una bilirrubina
total de 1.3-23.9mg/dl, AST 1,960-29,700U/L y una ALT de 12,000-12,550U/L. El
patrón característico incluye coagulopatía de leve a severa y AST mayor que la ALT en un márgen considerable
.

TRANSAMINASA GLÚTAMICO PIRÚVICA


EC 2.6.1.2 TGP

RESUMEN

Es un test de función hepática, la ALT es más
sensible para la detección del daño del hepatocito que para obstrucción
biliar.
Es más específica que la AST (GOT) en el daño del hígado.
Utilizada en la cirrósis hepática, y en otras enfermedades del hígado.
Se encuentra aumentada en el sindrome de Reye, junto con la AST.
La pruebas de tamizaje para hepatitis incluyen hepatitis no-A no-B. La
hepatitis aguda A o B puede ser confirmada serológicamente, al igual
que la hepatitis C. Los hallazgos serológicos negativos en presencia de
pruebas químicas anormales puede sugerir hepatitis inducida por drogas,
que puede ser soportada por la desaparición después de suspender dichos
medicamentos.
La combinación de AST y ALT altas con marcadores de hepatitis negativos
pueden ocurrir en una serie de infecciones que incluyen mononucleósis
infecciosa.
Es una prueba sensible para falla cardiaca.

Dentro de las entidades en las cuales la AST y
ALT se encuentran aumentadas están las aplicaciones terapéuticas de
heparina porcina y bovina.
En niños con leucemia linfoblástica aguda (ALL), la actividad alta de
la ALT en el diagnóstico está asocida con la rápida progresión de ALL.
La hepatotoxicidad por acetaminofen puede ser potenciada en pacientes
alcohólicos, en los quienes la coagulopatía y los niveles
extremadamente anormales de aminotransferasas han sido descritas, la
ALT menos que la AST.
La relación AST / ALT está alta en enfermedad hepática alcohólica, pero
también está por encima a menudo en cirrósis no alcohólica.
Radios ALT/AST están entre 0.5-0.8 con hepatitis viral aguda o crónica.

FOSFATASA ALCALINA

E.C 3.1.3.1 FOSFATASA ALCALINA

La fosfatasa alcalina (ALP) es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de moléculas como nucleótidos, proteínas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosfático se denomina desfosforilación. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son más efectivas en un entorno alcalino.

La fosfatasa alcalina recibe el nombre de orto-fosfórico-monoéster hidrolasa. Éstas enzimas proceden de la ruptura normal de las células sanguíneas y de otros tejidos, muchas de ellas no tienen un papel metabólico en el plasma excepto las enzimas relacionadas con la coagulación y con el sistema del complemento La fosfatasa es una enzima clasificada dentro de las hidrolasas. Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en huesos, hígado, placenta, intestinos y riñón Tanto el aumento, así como su disminución en plasma tienen significado clínico.

La fosfatasa alkalina (ALP) tiene identificadas
por lo menos 9 isoenzimas. Cada una tiene varias propiedades de
estabilidad al calor, inhibición química, y mobilidad electroforética.
Entre ellas están la rápida (pre-hepática), la hepática, la ALP del
hueso, placentaria, Reg
Quimica Clinica Fosfatasa Alcalina http://d1.scribdassets.com/ScribdViewer.swf?document_id=13590698&access_key=key-mp8ycpt6ds0xhzw0exx&page=1&version=1&viewMode=list an, Nagao, renal, intestinal y PA.
El principal interés de los laboratorios es la diferenciación de la ALP
del hueso y la hepática, y para tal fin, el mejor método es la
inactivación al calor. El interés secundario es la presencia de
isoenzimas de "tumor" más estables al calor : Regan, Nagao y renal.

http://es.wikipedia.org/wiki/Fosfatasa_alcalina

http://www.lablasamericas.com.co/newDB/examenes.php?codigo_examen=F532

http://www.idim.com.ar/UserFiles/Image/investigacion/foto-nuestro-compromiso.gif