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PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA LIQUIDO SEMINAL






LIQUIDO SEMINAL-ESPERMATOBIOSCOPIA

PRUEBAS COMPLEMENTARIAS

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Morfología por Criterios Esctrictos

Kruger
y col. Informaron que si se realiza la evaluación morfológica del semen
utilizando los criterios estrictos desarrollados en el Hospital de
Tygerberg este método es de gran valor predictivo en fertilidad. Según
estos autores se debe considerar como normal a aquel espermatozoide
cuya cabeza tenga una configuración oval con un acrosoma bien
diferenciado que ocupe entre el 40 % y el 70 % de la cabeza espermática.
De acuerdo a este sistema de clasificación se comprobó que la población
de hombres normales posee valores que están por encima del 14 % de
formas morfológicamente normales.

PBAS
PARA LA DETECCIÓN DE
ANTICUERPOS UNIDO IMNUNOBEADS

Los anticuerpos anti espermáticos son detectados microscópicamente usando
"inmunobeads", pequeñas esferas de resinas a las que se acoplan
anticuerpos. Si los anticuerpos anti espermáticos se hallan unidos a la
superficie de los espermatozoides, las células espermáticas se unirán a las
"inmunobeads".

Espermatozoides negativos por este método son mezclados con el suero o el
moco cervical a evaluar, posteriormente se examina la unión a
"inmunobeads".

UTILIDAD CLINICA

En algunos casos, factores inmunológicos pueden jugar un papel importante en
la infertilidad. Los anticuerpos anti espermáticos pueden ser producidos por el
hombre y/o la mujer. El hombre puede desarrollar anticuerpos anti espermáticos
contra sus propios espermatozoides, y la mujer puede generar anticuerpos contra
los espermatozoides de su pareja.

Los anticuerpos anti espermáticos
pueden contribuir a la infertilidad de varias maneras:

     
• Inmovilizar los espermatozoides antes de que
éstos alcancen el moco cervical.

     
• Si se encuentran localizados en el moco
cervical, los anticuerpos anti espermáticos pueden atrapar las células
espermáticas en la estructura del moco, impidiendo su migración en el útero.

     
• Interfieren de manera directa durante el
proceso de interacción entre el ovocito y el espermatozoide, impidiendo la
fertilización.

     
El ensayo de evaluación de anticuerpos anti
espermáticos se utiliza para detectar anticuerpos en el semen, suero y moco
cervical.

 

Inmunobeads Directo:

     
Este ensayo demuestra la presencia de Anticuerpos
antiespermatozoides unidos a la superficie de las gametas del paciente con
esterilidad autoinmune.

Inmunobeads Indirecto:

     
Se evalúa la presencia de Anticuerpos
antiespermatozoides del tipo IgG en suero sanguíneo, plasma seminal, moco
cervical, secreción endometrial y líquido folicular.

 

 

PRUEBA MIXTA DE ANTIGLOBULINAS

 

     
Para IgG y Ig A se mezclan con semen
fresco, se  utilizan partículas de látex

     
Formación de aglutinados máximos
entre las partículas

     
Diagnostico  de infertilidad inmunológica es probable cundo
en 50% de espermatozoides  tienen  partículas adheridas.

 

PRUEBAS
OPTATIVAS

 

1. MOST:

     
Evalúa la resistencia de los espermatozoides al someterlos a aun
estrés térmico, y su efecto en la movilidad de los mismos.

 

2.      
PRUEBA DE HINCHAZÓN (TEST
HIPOSMOTICO)

 

     
Se basa en la semipermeabilidad de
la membrana celular intacta que causa que los espermatozoides  se hinchen en condiciones hipoosmoticas,
cuando la entrada de agua produce expansión en el volumen de la célula.

 

PROCEDIMIENTO: La prueba de hinchazón de
espermatozoides en medio hipo-osmótico (HOS)4.en
la cual se incubaron 100 ul de semen con 1 ml de solución hipo-osmótica durante
1 hora; luego se cuentan los espermatozoides que incorporaron la solución
(evidenciado por hinchazón de la cola).

 

 

3.     
ESPERMATOBIOSCOPIA POR EQUIPO
AUTOMATIZADO

 

Es
un instrumento electrooptico que realiza una evaluación objetiva, segura y
cuantitativa de la calidad del semen, proporcionando un método infinitamente
más objetivo en comparación con el método tradicional, pudiendo llegar a un
diagnóstico más efectivo del potencial fertilizador del paciente.
El
equipo está basado en la digitalización de las oscilaciones de la densidad
óptica, que los espermatozoides móviles producen en una celda fotoeléctrica.
Todo el proceso de lectura, interpretación de los datos y la obtención de cada
uno de los parámetros es controlado y procesado mediante algoritmos matemáticos
patentados por Medical Electronic Systems Ltd de Israel.

4.      
CULTIVO DE SEMEN

     
El cultivo de semen consiste en analizar el
semen en busca de infecciones causadas por bacterias, hongos, etc…

     
En la mayoría de los casos, esta prueba se
solicita en pacientes con síntomas de prostatitis u orquitis.

Toma de muestra:

Todas las muestras deben
tomarse con 72 hs de abstinencia sexual y retención urinaria mínima de 3 horas.
La abstinencia sexual permite detectar la mayor concentración de MO infectantes
en las vías espermáticas y glándulas anexas, como así también minimiza la
contaminación con los MO de la flora normal o colonizantes transitorios de la
compañera sexual. El paciente, en el momento de la realización del estudio, no
debe presentar secreción uretral ni infección urinaria.

Interpretación de
resultados:

Se considera una muestra
positiva aquella cuyo recuento de colonias es ³ 103 UFC/ml de bacterias de
pato-genicidad reconocida o ³ 104 UFC/ml de bacterias potencialmente patógenas
y solamente una especie aislada.

 

La infección por micoplasma
puede asociarse a de una reducción de la motilidad de los espermatozoides, la
producción de anticuerpos antiespermáticos y una penetración anormal en el
óvulo. Se requieren estudios clínicos controlados para determinar específicamente
cualquier vínculo entre una infección por micoplasma y la infertilidad en el
hombre. 

Separación de espermatozoides por
migra­ción-sedimentación (M/S, “jumping”):

Con esta técnica se recuperan los
espermatozoides móviles que migran al compartimiento interno del tubo de Jondet
7 Para cada muestra de semen se
valoró la motilidad y la concentración antes y después de la separación.

 


 

5.     
TEST DE NARANJA DE ACRIDINA

 

El ensayo
naranja de acridina mide la susceptibilidad del ADN del espermatozoide al ácido
inducido por la desnaturalización in situ por cuentificación del cambio metacromático
del naranja de acridina fluorescente del verde (ADN natural) al rojo (ADN
desnaturalizado).

 

El naranja de
acridina fluorescente se intercala entre las dobles cadenas de ADN como un
monómetro

y liga las
cadenas simples del ADN como un agregado.

El naranja de
acridina monométrico vira al ADN natural o verde fluorescente mientras que el
naranja

de acridina
agregado al ADN desnaturalizado vira a rojo fluorescente49. El naranja de
acridina puede usarse tanto con el microscopio de fluorescencia como con
citometría de flujo.

     
Tinciones
con naranja de acridina muestran una diferencia significativa entre los varones
fértiles y aquellos que son infértiles por diferentes patologías andrológicas.

     
El
valor de corte entre varones fértiles e infértiles varía entre el 20 y el 50%.

 

 

PROCEDIMIENTO:

Los espermatozoides pre y postseparación se incuban durante 5
minutos con 6 ug/ml de naranja de acridina (Naranja de Acridina, Sigma chemical
Co.), posterior a esta incubación se observaron 100 espermatozoides en el
microscopio de fluores­cencia. La fluorescencia verde en la cabeza indica DNA
de doble cadena y el DNA de ca­dena simple, que está desnaturalizado emite
fluorescencia roja.

 

 

UTILIDAD CLÍNICA:  

     
Control de calidad de donantes de
semen para bancos de esperma.  

     
Diagnóstico en pacientes con
fertilidad reducida y espermograma aparentemente normal.  

     
Chequeo espermático para
procedimientos de FIV.  

     
Evaluación de causas posibles en
abortos recurrentes.  

 

 SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:  

Se
basa en el principio que la naranja de acridina se enlaza al DNA doble cadena
normal dando fluorescencia verde y al DNA simple cadena desnaturalizado dando
fluorescencia roja.

Un alto porcentaje de cabezas espermáticas rojas puede asociarse a
un potencial de fertilidad disminuido.  

 

 

VALOR DE REFERENCIA: ³ 45% de células verdes  


LPOp

Test que determina la
injuria producida por los radicales libres sobre la membrana
plasmática. Ha sido incorporado dentro de los tests de función
espermatica, ya que permite conocer el stress oxidativo producido por
las sustancias oxígeno reactivas.

ROS (Sustancias oxígeno reactivas)

La
causa de daño peroxidativo in vivo, podría demostrarse por la capacidad
de los espermatozoides humanos de generar sustancias oxígeno reactivas,
como el anión superóxido o el peróxido de hidrógeno. Ambas pueden
iniciar el daño peroxidativo con la consiguiente pérdida de la función
espermática

MOST (Stress Test Modificado)

La
pérdida de la movilidad espermática está asociada con el envejecimiento
de las gametas y la peroxidación lipídica endógena. Este test estudia
la movilidad post swim up o percoll y se lo ha relacionado con una
peroxidación lipídica forzada. El MOST permite predecir fertilización y
correlaciona significativamente con anormalidades relacionadas a las
gametas masculinas.

Reacción Acrosomica

El
estudio de la reacción acrosómica (RA) por medio de diferentes
lectinas, ha demostrado ser un método muy eficaz como prueba de la
función espermática. Generalmente se estudia la RA espontánea
conjuntamente con la inducida por ionóforo de calcio.

Test de Hiperactivación

Por
medio de este test, es posible determinar los cambios en el modelo de
movimiento de los espermatozoides, luego de incubar las muestras en un
medio de cultivo capacitante.
Utilizando un software desarrollado por Hamilton-Thorne Research es
posible conocer la velocidad curvilinea, la velocidad rectilinea, la
linearidad porcentual de las gametas en estudio y el desplazamiento
lateral de la cabeza espermática.

Test de Sobrevida

Permite
conocer el porcentaje de espermatozoides que mantienen  su movilidad
luego de 24 hs de incubación, bajo condiciones controladas. Este test
se suele solicitar  como parte de los estudios de pacientes que
participan en un programa ded reproducción asistida de alta complejidad.

Determinación de ATP

A
través de una técnica bioluminiscente, es posible detectar cantidades
muy pequeñas de ATP en las células. Esta valoración permite conocer la
fuente primaria de energía, utilizada por el espermatozoide para
mantener la movilidad.

Fuente imagenes:http://www.lab-ler.com.ar/analisis.asp
http://www.lablar.com/lar/images/FCKeditor/Image/pipeta.jpg

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