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MANUAL PARA EL DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO



MANUAL PARA EL DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO
DE LA TUBERCULOSIS -CULTIVO-


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CONTENIDO

UTILIDAD DEL CULTIVO. 9
ORGANIZACIÓN DE LOS SERVICIOS CULTIVO EN LA RED DE LABORATORIOS. 11
EL BACILO DE LA TUBERCULOSIS Y OTRAS MICOBACTERIAS PRESENTES
EN MUESTRAS CLÍNICAS DEL HOMBRE. 13
FUNDAMENTOS DE LOS PROCEDIMIENTOS UTILIZADOS PARA EL CULTIVO
DE Mycobacterium tuberculosis. 17
Persistencia del bacilo en muestras de la lesión. 17
Resistencia del bacilo a agentes decontaminantes . 17
Concentración de los bacilos. 18
Exigencias para el desarrollo del bacilo in vitro. 18
Nutrientes en los medios de cultivo . 18
Condiciones y tiempo de incubación. 19
Contaminación cruzada. 20
Cuantificación del desarrollo de M. Tuberculosis. 20
ELECCIÓN DEL MÉTODO DE CULTIVO SEGÚN LOS RECURSOS DISPONIBLES . 21
Método de Kudoh Ogawa. 21
Método de Petroff. 22
Métodos más costosos. 23
Empleo de medios sintéticos. 23
Sistemas para la lectura automatizada de cultivos. 23
Ubicación de las tareas y de los equipos. flu jo del material . 25
Tareas de muy bajo riesgo. 25
Tareas de riesgo mediano. 26
Tareas de mayor riesgo . 26
El laboratorio de procesamiento de muestras y aislamientos. 26
Área de esterilización de material contaminado. 28
Escalamiento de la bioseguridad en las instalaciones de laboratorios de referencia
con alto riesgo biológico. 28
TOMA, RECEPCIÓN, CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS. 31
TÉCNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA EL CULTIVO DE MUESTRAS. 33
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS. 33
Entrenamiento del personal. 33
Organización del material . 33
Preparación de las muestras. 35
Recuperación de material tomado por hisopado. 36
Concentración de muestras líquidas o semifluídas. 37
Maceración de muestras de tejido tomadas por biopsia. 37
Eliminación de desinfectantes de muestras de esputo. 38
Digestión, decontaminación, y concentración por el Método de Petroff modificado. 38
Inoculación de los medios de cultivos y preparación del frotis. 40
Organización del procesamiento simultáneo de distintos tipos de muestras. 40
Acondicionamiento del material para el autoclavado . 41
Incubación de los tubos inoculados . 41
Fijación y tinción de los frotis. 41
Decontaminación de áreas de trabajo y equipos. 41
Lectura e informe de resultados de las baciloscopias . 42
Otros métodos de decontaminación/homogenización. 42
N-acetil-cisteina-hidroxido de sodio (NALC-NaOH). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Método de Kudoh Ogawa . 42
Decontaminación con soluciones ácidas. 43
Agregado de suplementos a los medios de cultivo. 43
Incubación en condiciones especiales. 43
LECTURA E INFORME DE RESULTADOS . 50
Control visual periódico. 50
Registro de resultados. 51
Procedimientos especiales de lectura . 51
Agar en placa delgada . 51
Lectura manual de medios con sensores del desarrollo. 51
Lectura automatizada de caldos . 52
Procedimientos a seguir cuando se detecta desarrollo. 52
Selección de cultivos positivos para identificación y prueba de sensibilidad. 53
Informe de resultados. 54
Descarte de tubos inoculados. 54
IDENTIFICACIÓN DE Mycobacterium tuberculosis . 55
Morfología de las colonias. 55
Precauciones para procesar cultivos positivos. 56
Características microscópicas. 57
Pruebas bioquímicas . 57
Prueba de niacina . 57
Inhibición de catalasa a 68 °C. 59
Reducción de nitrato. 60
Pruebas moleculares . 61
CONTROL DE CALIDAD. 65
CONTROL DE CALIDAD INTERNO. 65
Medios de cultivo, en particular a base de huevos. 65
Aspecto . 65
Sensibilidad . 66
Esterilidad. 66
Registro de elaboración o recepción, control y consumo de medios de cultivo. 66
Organización del trabajo, calidad de los registros. 66
Seguimiento de los resultados . 67
Diario . 67
Periódico. 68
Relación entre resultados de baciloscopias y cultivos. 68
Contaminación. 69
Análisis de la demora en la entrega de informes . 70
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO. 70

FUENTE: OPS-OMS

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