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ANTICUERPOS CONTRA VIH

DETERMINACION DE VIH

Método:
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) .


TMA (Transcription Mediated Amplification ) determina la presencia del virus de la hepatitis C consta de tres etapas:

1)
preparación de las muestra donde se libera en material genético de la
partícula viral y se separa por hibridación sobre una partícula
magnética
2) TMA donde se da la amplificación isotérmica del RNA con un intermediario de DNA doble hebra
3)
detección hibridación con sondas marcadas con ester de acridina y
posterior oxidación que genera una señal tipo flash para el control
interno y una señal “lenta”para el material genético de la
muestra..tiene una sensibilidad de 5 IU/ml .es 10 veces mas sensible
que las técnicas de PCR

Valor de referencia: Negativo.

Significado clínico:
Es un método directo que se utilizan para resolver situaciones donde la serología no permite llegar a un diagnóstico definitivo.
Constituye
una técnica altamente sensible que logra detectar hasta una copia de
ADN viral o provirus, mediante amplificación de un segmento
seleccionado del provirus presente en el ADN de las células infectadas
por HIV-1.Especialmente utilizada para realizar el diagnóstico precoz
de infecciones por el HIV-1 en niños menores de 18 meses de edad y se
puede lograr una sensibilidad y especificidad del 100%.

En muestras
pediátricas se toman a los 7 días y a los 30 días de la primera muestra
influyendo la medicación de la madre intraparto y durante el embarazo
así como la carga viral de la madre.

Utilidad Clínica:

  • Evaluar: Individuos con sintomatología sospechosa no confirmada por la presencia de anticuerpos (serología indeterminada).
  • Diagnóstico:
    Confirma la infección en niños nacidos de madres HIV positivas. Es la
    técnica de elección para detectar transmisión vertical pre o perinatal
    de madre a hijo. Pacientes que han tenido contacto reciente con
    personas HIV confirmadas o en accidentes laborales.

Método: enzimoinmunoanálisis (ELISA),
pruebas de microaglutinación de partículas sensibilizadas.

Muestra: suero.

Valor de referencia: no reactivo.

Significado clínico:
Estas
técnicas utilizan soportes en fase sólida (policubetas, membranas,
perlas) sobre los cuales se absorben varias formas de los antígenos de
HIV (lisado viral, proteínas vírales purificadas o recombinantes,
péptidos sintéticos). Los que utilizan lisado viral contienen un
numeroso y amplio rango de sitios antigénicos, que representan la
mayoría de las proteínas del HIV. Esto asegura la detección de
anticuerpos contra diferentes subtipos de HIV y reduce la posibilidad
de perder variantes, pero compromete la especificidad del ensayo, dando
lugar a resultados falsos positivos.

Los sueros que contienen
anticuerpos que reconocen un epitope, compartido por HIV y otros virus
o bacterias, o anticuerpos que unen antígenos leucocitarias humanos y
otros componentes de la célula del huésped presentes en lisado, son
falsamente reactivos. Esta reactividad se evita usando proteínas
recombinantes o péptido sintético como fuente de antígeno. De todas
maneras los péptidos recombinantes pueden contener contaminantes
(proteínas de bacterias o levaduras) e incluso restos antigénicos,
provenientes de la proteína de fusión, que causen algunos resultados
falsos positivos. En síntesis, los péptidos recombinantes permiten un
aumento de sensibilidad y pronta detección de la seroconversión.

En
los ELISA de última generación el conjugado es el antígeno viral, con
lo cual se acorta el período de ventana serológica debido a la
posibilidad de detectar distintas clases de inmunoglobulinas.

En las
pruebas de aglutinación los antígenos vírales son unidos a
micropartículas que pueden ser de distinto material (de látex,
gelatina, sintéticas o glóbulos rojos). La sensibilidad de esta técnica
es similar al ELISA

La producción de anticuerpos es detectable 4-12
semanas después de la infección y persisten de por vida. Su formación
está estimulada por la persistencia de la infección viral, aun cuando
el virus está restringido al sistema reticuloendotelial por años.
La diferenciación de clase de inmunoglobulinas no tiene utilidad.
Luego
de la infancia, los niños que son portadores de HIV,. los anticuerpos
son aún detectables en sangre En un recién nacido hay que tener en
cuenta que los anticuerpos maternos de una madre pueden dar un
resultado falso positivo.

Utilidad clínica
Screening
de infección por HIV. Las pruebas de tamizaje son técnicas de gran
sensibilidad que permiten la pesquisa de individuos infectados,
pudiendo generar resultados falsos positivos. Por lo tanto no se
utilizan como diagnóstico definitivo.
Resultado positivo: repetir y en caso positivo realizar la confirmación por Western-blot.
Resultado negativo: ausencia de infección o realización de la prueba antes de la respuesta inmunológica (período de ventana).

Falsos positivos: en sujetos con trastornos inmunológicos o que han recibido múltiples transfusiones.

Falsos negativos: poco frecuentes.

Método: Western blot (WB)

Muestra: suero.

Valor de referencia: negativo

Significado clínico:
Western-blot (WB):
Detecta
anticuerpos contra HIV usando enzimas conjugadas a anticuerpos contra
inmunoglobulina humana y proteínas de HIV inmovilizadas en fase sólida.
Las proteínas son previamente separadas electroforéticamente y luego
transferidas a membranas de nitrocelulosa sobre las que se efectúa un
ELISA indirecto. La intensidad de cada banda se evalúa visualmente
comparándola con una tira control que exhibe todas las proteínas
principales. El resultado de WB se interpreta como positivo,
indeterminado o negativo sobre la base del número y tipo de bandas
observadas en cada tira. Se han establecido diferentes criterios de
interpretación por distintas organizaciones.


El criterio utilizado
en nuestro laboratorio es el de la ASTPHLD (Association of State and
Territorial Public Health Laboratory Directors ) y el del Center
Disease Control (CDC) que establece:

  • WB positivo: Cuando presenta por lo menos dos de las siguientes bandas p24, gp41, gp120/gp160.
  • WB negativo: Ausencia total de bandas.


WB
indeterminado:
Presencia de cualquier banda sin que se cumpla el
criterio de positividad. Este resultado puede resolverse por Reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) o repitiendo el WB en 3-6 meses. El
CDC recomienda considerar como negativo un resultado WB indeterminado
estable por lo menos por 6 meses en un individuo asintomático.

Utilidad clínica:
Diagnostico: confirmación de serología positiva para HIV de una prueba de screening (ELISA).
Las
pruebas confirmatorias son más especificas que las pruebas de tamizaje
o screening ya que en algunas ocasiones otros anticuerpos de distinto
origen del HIV pueden dar reacción cruzada en las pruebas de screening.
Un resultado positivo debe ser confirmado por uno o más métodos
alternativos

http://www.westernblotinfo.com/western-blot/method/western-blot-sample-preparation/

http://www.ciudad.jovenclub.cu/VIH-SIDA/Imagenes/a_sangre_1.jpg

http://www.aids-sida.org/VIH-LoRes.JPG
http://nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1993/illpres/pcr.gif


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