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PRUEBA BIOQUIMICA-OXIDASA-COAGULASA-





PRUEBA DE LA OXIDASA



Esta prueba sirve para determinar la presencia de
enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un
sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo que es reducido
por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la
especie bacteriana.

Durante al prueba la enzima oxidasa en presencia
de oxigeno, citrocromo C y el reactivo de la oxidasa, este se oxida para
producir un compuesto colorido llamado indofenol, el reactivo mas usado es el
reactivo de kovacs oxidasa, que es una solución de tetrametil-p-fenilendiamina
al 1%.

El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de
electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el
sistema citocromooxidasa sólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos
anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo (Vibrio
fetus
), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa.

 Así mismo,
la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta
degrada el peróxido de hidrógeno  que se produce como consecuencia de la
reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica.

LA PRUEBA DE LA OXIDASA SE USA SOBRE TODO PARA

     
Identificar todas las especies de Neisseria
(+)

     
Diferenciar Pseudomonas de los miembros
oxidasa negativos de las enterobacterias.

     
También se usa en algunos casos para diferenciar
género y especie de otras bacterias.

El reactivo de la oxidasa más recomendado es la
solución acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina
(reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más sensible que el
correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más
caro. Este reactivo tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira
gradualmente a púrpura-negruzco intenso.

REALIZACIÓN DE LA PRUEBA:

  1. Método
    en placa directa

Realización de la
prueba:

  1. Método en placa directa
  • Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas
    colonias. No inundar toda la placa y no invertirla.
  • Observar los cambios de color. Con el reactivo de
    Kovacs la reacción se produce en unos 10-15 segundos(UN COLOR VIOLETA),
    mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de
    los 10-30 minutos.
  1. Método indirecto sobre papel
  • Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente
    en una placa de Petri.
  • Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro
    del papel.
  • Extender con el asa de siembra una colonia sobre el
    papel impregnado.
  • La reacción de color positiva se produce a
    los 5-10 segundos.


PRUEBA
DE LA COAGULASA

 

La prueba de la coagulasa es usada específicamente para diferenciar las
especies del genero staphylococccus:

S. aureus

Positiva

S. epidermidis

Negativa


 

 

La coagulasa es una enzima producida por S. aures, es relativamente
estable al calor, resiste temperaturas arriba de 60C por 30 minutos. Algunos microbiólogos
establecen que al coagulación del plasma ocurre en 2 etapas:

 

  1. Hay una reacción entre la enzima
    producida por la bacteria, una porción coagulasa, con un factor o
    activador presente en el plasma para producir la coagulasa.

La coagulasa real del plasma es activada por
la coagulasa.



TECNICA EN PORTAOBJETOS

  1. Prepare una suspensión
    gruesa y bien homogénea de cada microorganismo en una solución salina estéril.
  2. Ponga una gota
    de la suspensión y una gota de plasma humano o de conejo sobre un
    portaobjetos, mezclar suavemente con el asa y después por rotación.

  3. Observe si hay
    aglutinación microscópica lo que indica una prueba positiva

Observe si hay
aglutinación microscópica lo que indica una prueba positiva

INTERPRETACION:

  • Una prueba
    positiva, usualmente ocurre entre 5-20 segundos.
  • La prueba
    negativa si la aglutinación no ocurre dentro de 3-4 minutos.




TECNICA EN TUBO

  1. En un tubo de 13 x 100 esteril mezclar 0.5 ml  de plasma humano o de conejo y una asada grande de la bacteria aprobar. Rotar suavemente el tubo sin sacudir.
  2. Incubar a 35 grados C de 4-6 horas, observe cada 30 minutos.

PRECAUCIÓN: cuando este checando no sacude el tubo, inclínelo suavemente para ver
el coagulo, si este no es visible al final de las 6 horas, déjelo en la
incubadora por 24 hrs.

INTERPRETACIÓN
Prueba positiva

  • Coagulo completo
  • Coagulo parcial, el coagulo no abarca
    completamente la columna del fluido.

Prueba negativa:

  • No hay formación de coagulo, la
    suspensión permanece homogénea



Fuente:
http://www.uvg.edu.gt/dti/profesores/ggini/bacteriologia/cocosgramnegativo.htm

2 comentarios

  1. Con Todo El Respeto Busca Colores Favorables Al Publicar Una Información

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