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PRUEBA BIOQUIMICA DEL INDOL

Mediante esta prueba se detecta
la liberación de indol en un cultivo bacteriano.
Dicha liberación se debe a la degradación
del aminoácido triptófano mediante el enzima
triptofanasa.

Para la realización
de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas
en un caldo de triptona con NaCl al 0,5% (la triptona
presenta abundante triptófano). Para la posterior
detección del indol se usa el reactivo de Kovacs
que se puede preparar con los siguientes ingredientes:

  • Alcohol amílico o isoamílico
    (puede sustituirse por alc.butílico)……..150ml
  • p-dimetilamino-benzaldehído………………………………………………….10g
  • HCl (concentrado)……………………………………………………………….50ml

Se disuelve primero el aldehído
en el alcohol y después se agrega lentamente a
esta mezcla el ácido. Para el control de calidad
del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las
más convenientes son Escherichia coli (indol+)
y todas las especies de Klebsiella (indol-).


Si la bacteria posee la enzima triptofanasa,
al añadir al medio 5 gotas del reactivo de Kovacs,
se producirá un anillo de color rojo en la superficie
del caldo y la prueba será considerada positiva.
Si esto ocurre después de 24 horas, la prueba se
considera completa, pero si es negativo deberá
incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello
es conveniente hacer siempre la prueba no en el tubo incubado
sino en una porción de unos 2ml que se retira de
él asépticamente.
FUENTE. JOSECORTES.COM


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