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ESQUEMA TINCION DE BARR

TINCION DE BAAR

 La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR.

Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. La tinición fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 to 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo.


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Técnica



Hay dos variantes de esta técnica, la llamada "en caliente" y "en frío" o de Kinyoun y se siguen los siguiente pasos


Variante clásica o "en caliente"




   1. Hacer un frotis de la muestra de esputo.


         1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede
adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del
portaobjetos durante la tinición.


         2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla
de tinción con los extendidos hacia arriba. Coloque todos los
portaobjetos orientados uniformemente, con el frotis hacia arriba.
Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.


   2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.


   3. Aplicar fucsina-fenicada.


         1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este período.


   4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).


         1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada
penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se
seque el colorante.


         2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos.
Retire el exceso de agua.


   5. Decolorar con alcohol-ácido.


         1. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal
como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 3
minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que
no son bacilos TBC puede permanecer teñido. Enjuague con agua una vez
más los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos aún
están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución decolorante
de 1 a 3 minutos.


   6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).


         1. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.


   7. Enjuagar con agua


         1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada
portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.


         2. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 10 x 100




Variante de Kinyoun o en "frío"




   1. Hacer un frotis.


   2. Dejarlo en el puente de tinción.


   3. Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).


   4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.


   5. Decolorar con alcohol acido.


   6. Lavar con agua del grifo.


   7. Contrastar con azul de metileno

http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl_Neelsen
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